2009 – IDENTIFICAZIONE DI FENOTIPO LINFOCITARIO CITOTOSSICO E PRODUZIONE DI INTERFERONE-γ MEDIANTE MARCATURA INTRACELLUARE NEL SUINO
Parole chiave: marcatura intracellulare, interferone-gamma (IFNγ), citotossicità, linfociti
Scopo del presente studio è stato l’ottimizzazione della tecnica di marcatura intracellulare di IFNγ associata alla marcatura di antigeni di superficie (CD8α, CD8β, TCRγ/δ, CD16) per l’identificazione di cellule ad attività citotossica innata e specifica mediante citofluorimetria a flusso a seguito di stimolazione policlonale (aspecifica) con PMA/Ionomicina e monoclonale (virus-specifica) con antigene vaccinale di Aujeszky’s Disease Virus (ADV). L’ottimizzazione delle fasi della metodica, ossia attivazione in vitro, marcatura di superficie e fissazione, permeabilizzazione e marcatura intracellulare di IFNγ, hanno permesso l’identificazione di cellule producenti IFNγ per tutti gli antigeni citotossici indagati e la quantificazione delle cellule responsive in animali di differente età. Inoltre, sono state identificate e quantificate le cellule responsive ad ADV a differenti tempi dalla 1a e 2a vaccinazione. Le condizioni sperimentali ed i risultati ottenuti possono quindi sostenere l’utilizzo di tale metodica in associazione con altre tecniche immunologiche sensibili e specifiche quali il saggio ELISpot per determinare lo stato di reattività del sistema immunitario di animali soggetti a protocolli di vaccinazione o per monitorare la risposta immunitaria a seguito di infezioni in cui quella cellulo-mediata risulta fondamentale per favorire l’eliminazione del patogeno.
